La Sagrestia Vecchia, denominata anche Cappella del Sacro Chiodo, si apre sul fianco destro della chiesa della Santissima Annunziata. Negli anni quaranta del Quattrocento lo spazio fu ristrutturato per ospitare le preziose reliquie acquistate dall’ospedale nel 1359 e fino ad allora conservate nella Cappella del Manto. La decorazione pittorica dell’intero spazio e quella dell’ Arliquiera, l’armadio destinato a contenere le reliquie (qui ricollocata in deposito dalla Pinacoteca Nazionale, grazie all’accordo con il Polo museale della Toscana), furono realizzate da Lorenzo di Pietro detto il Vecchietta tra 1445 e 1449. Il programma iconografico delle pareti e del soffitto, di grande complessità e suggestione, è incentrato sul il ciclo cristologico e illustra gli Articoli del Credo, con riferimenti a Nuovo e Antico Testamento. Sotto il baldacchino marmoreo tardo quattrocentesco fu nel 1610 trasferito l’affresco della Madonna del Manto, opera di Domenico di Bartolo, realizzato nel 1444 per la Cappella del Manto e rimosso in occasione della realizzazione del portale.